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ホーム製品 / サービス情報遺伝子発現調節試薬 / カスタムオリゴ合成shRNA発現用レンチウイルスベクター
shRNA発現用レンチウイルスベクター

オフターゲット効果を最小限に抑えながら、一過性、長期安定的、誘導性、またはin vivoにおける遺伝子サイレンシングを実現

Highlighted products

SMARTvectorTM lentiviral shRNA

最先端のshRNAデザインとプロモーターおよび蛍光レポーターが選択できる遺伝子ノックダウン保証付きshRNA

SMARTvectorTM inducible lentiviral shRNA

SMARTvector lentiviral shRNAの全利点に加えて、遺伝子ノックダウンをかつてないほど制御する Tet誘導テクノロジーを採用

 

概要

ヘアピン型のshRNA(Short hairpin RNA)配列は、プラスミドトランスフェクションまたはウイルス形質導入を介して細胞に導入できるDNAベクターにコード化されています。shRNA発現カセットはレンチウイルスを含むウイルスベクターシステムに組み込むことができるため、安定した細胞株を作製するために宿主ゲノムに組み込むことができます。さらに、いずれかのウイルス導入システムと組み合わせて使用すると、トランスフェクションが困難な初代細胞に導入したり、in vivoアプリケーションにも使用できます。導入方法とベクター設計に基づいて、ベクターベースのshRNAは、標的遺伝子の長期(または誘導可能な)ダウンレギュレーションを可能にします。

shRNAを用いた遺伝子ノックダウンの効率は、形質導入やトランスフェクションの効率、shRNAの発現を駆動・制御するプロモーター、およびエピジェネティックな修飾(shRNA発現のサイレンシングにつながる可能性があります)など、多くの要因の影響を受けます。さらに、これらの各要因がベクターのパフォーマンスに与える影響は、細胞株や細胞の種類によって異なります。shRNAを使用した実験を計画する場合、使用するshRNAの設計、ベクターの機能(プロモーターなど)、および導入方法などの利用可能なベクターオプションを、実験の要件に基づいて考慮する必要があります。

shRNAデザイン

shRNAのデザインは通常、単純なステムループshRNAとマイクロRNA様に改変したshRNA(マイクロRNAベースshRNA)の2つの形式があります。

シンプルヘアピン型shRNA

基本的なshRNAは、前駆体microRNA(pre-miRNA)でモデル化され、ウイルスベクターにクローニングされ、RNAポリメラーゼIII(Pol III)プロモーターの制御下で転写されます。shRNAは、長さが50〜70ヌクレオチドの一本鎖分子として生成され、一本鎖RNA(ループ)の領域と短い3 ‘オーバーハングでつながれた二本鎖RNA(ステム)の19〜29塩基対の領域で構成されるヘアピン型構造を形成します。転写されると、shRNAは核を出て、細胞質内のヌクレアーゼ Dicer によってループで切断され、RISCに入り、相補的mRNAの切断とその後の分解を指示します。

microRNAベースshRNA

microRNA様に改変したshRNAは、内在性microRNAのループとフランキングシーケンスに囲まれたmicroRNAのようなミスマッチを持つshRNAステム構造で構成されています。microRNAベースshRNAは、RNAポリメラーゼll(Pol ll)プロモーターから転写され、核内の内因性RNase III Drosha酵素によって切断された後、細胞質にエクスポートされ、 Dicer によってプロセッシングされ、RISC複合体にロードされます。研究では、DroshaDicerの両方で処理される microRNAベースshRNAを使用すると、プロセッシングがより効率的になり、in vivo RNAiの毒性が低下する可能性があることが示唆されています。

図1. shRNAアプローチには、遺伝子改変ウイルスベクターまたはプラスミドベースのベクターの導入が含まれ、それぞれ内因性microRNA scaffold(1)または単純なステムループshRNA(2)に埋め込まれたノックダウン配列を発現します。発現されたシーケンス(1と2、青色で表示)は初期の段階で内因性経路に入り、内因性microRNAメカニズムを使用して強力なノックダウン分子に効率的にプロセッシングされます。これらのアプローチはすべて、ターゲットmRNAの切断(紫色で表示)と遺伝子ノックダウンにつながります。

製品選択ガイド

SMARTvector shRNA GIPZ shRNA TRIPZ Inducible

shRNA

TRC shRNA
生物種 Human, Mouse, Rat Human, Mouse Human Human, Mouse
プロモーター 恒常発現:7種類より*1

誘導発現:4種類より

Human CMV Pol II TRE min-CMV U6 Pol III
Vector backbone レンチウイルス レンチウイルス レンチウイルス レンチウイルス
ステムループ形式 microRNAベース microRNAベース microRNAベース シンプルヘアピン型
蛍光レポーター遺伝子 GFP / RFP / 搭載無し GFP RFP 搭載無し
ノックダウン保証*2
in vivo RNAi
安定した細胞株の作成
初代細胞や非分裂細胞に推奨
誘導発現用
全ゲノムライブラリー Human, Mouse, Rat Human, Mouse Human Human
製品形態
  • ・大腸菌グリセロールストック *3
  • ・高力価ウイルス粒子
  • ・大腸菌グリセロールストック *3
    • ・高力価ウイルス粒子
  • ・Starter Kit *4
  • ・大腸菌グリセロールストック *3
  • ・Starter Kit *4
・大腸菌グリセロールストック *3

*1 一部のプロモーターオプションは、カスタム製品として、またはリクエストに応じてのみ利用できる場合があります。

*2 特定の製品について、規定の条件でターゲットmRNAレベルが70%以上減少することが保証されます。詳細はホライゾン・ディスカバリー株式会社または本社Horizonウェブサイトの各製品ページをご覧ください。

*3レンチウイルスベクターを形質転換した大腸菌の培養液にグリセロールを加えたもので、チューブあるいは96ウェルマイクロタイタープレートで提供されます。

*4 shRNA発現用レンチウイルスベクターを用いた遺伝子発現抑制実験に必要な試薬をパッケージにしたキットです。

関連リンク

【本社サイト】 Short hairpin RNA (shRNA)

【本社サイト】shRNA – Applications

【本社サイト】GIPZ lentiviral shRNA

【本社サイト】TRIPZ inducible lentiviral shRNA

【本社サイト】TRC lentiviral shRNA