- 目的のターゲット遺伝子の編集が保証されています
- タンパク質の機能的なノックアウトの可能性をアルゴリズムで最大化し、オフターゲット編集を最小化するようにデザインされています。
- トランスフェクションに対応した化学合成RNAにより、クローニングとin vitro転写ステップが不要です。
- ヌクレアーゼ耐性を改善するために化学修飾がされています。
注：デザイン済みガイドRNAの結果はすべて、予想されるノックアウトパフォーマンスの順にランク付けされています
概要
信頼性の高い遺伝子ノックアウト結果のための機能的および特異的ターゲティング
Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、S. pyogenes由来Cas9ヌクレアーゼのターゲット配列を認識させ、目的のゲノム領域におけるCas9を介したDNA二本鎖切断を起こす化学合成ガイドRNAです。
すべてのEdit-RガイドRNAは、挿入または欠失を起こすだけでなく、機能的なタンパク質ノックアウトが効率的に生ずるようにアルゴリズムによりデザインされています。さらに、化学修飾がすべてのEdit-R化学合成ガイドRNA製品に導入されおり、ヌクレアーゼによる分解が減少するため、全体的なゲノム編集性能が向上しています。
このような他に類を見ない正確性と効率により、Edit-Rのデザイン済み化学合成sgRNAは、パスウェイ分析や化学合成sgRNAライブラリースクリーニングからのヒットのフォローアップに理想的なツールになります。詳細については、この特集記事をご覧ください。
化学合成sgRNAを使用したEdit-R CRISPR-Cas9ゲノム編集実験に必要なコンポーネント：
- Cas9ヌクレアーゼ（発現用プラスミド、mRNA、タンパク質、または発現用レンチウイルスベクター）
- 目的の遺伝子をターゲットとするようにデザインされたEdit-R化学合成sgRNA
大規模な実験には
ヒトゲノムおよび遺伝子ファミリー全体のスクリーニングのために、デザイン済み化学合成sgRNAライブラリーのアレイ化コレクションをご参照ください。
製品情報
Edit-R デザイン済みSynthetic sgRNA (化学合成sgRNA)
| 製品 | 生物種 | Size |
|---|---|---|
| Edit-R Synthetic sgRNA | Human | 1, 3, 5, 10 nmol |
Edit-R Synthetic sgRNA (化学合成sgRNA)用コントロール
| 製品 | 製品タイプ | 生物種 | Size |
|---|---|---|---|
| ポジティブコントロールSynthetic sgRNA | |||
| Edit-R PPIB Synthetic sgRNA Positive Control | ポジティブコントロールSynthetic sgRNAの | Human | 1, 5, 10 nmol |
| Edit-R DNMT3B Synthetic sgRNA Positive Control | |||
| Edit-R PPIB Synthetic sgRNA Control Kit | ポジティブコントロールSynthetic sgRNAおよびPCRプライマ | ||
| Edit-R DNMT3B Synthetic sgRNA Control Kit | |||
| Edit-R Lethal Synthetic sgRNA Control #1, #2 | Cas9の機能性とcrRNA導入効率のモニター用 | Human | 1, 5, 10 nmol |
| ネガティブコントロールSynthetic sgRNA | |||
| Edit-R Synthetic sgRNA Non-targeting Control #1～5 | ネガティブコントロールcrRNAのみ | － | 1, 5, 10 nmol |
サポートデータ
遺伝子ターゲットごとに単一のデザイン済み化学合成sgRNAを使用したCD4 + T細胞のタンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析
初代ヒトCD4 + T細胞は、Lonza 96-well Shuttleシステムを介して、遺伝子ターゲットごとに個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたは非ターゲティングコントロール（NTC）を使用して、Cas9 RNPで核内に導入された。72時間後、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、FACS分析によりターゲット遺伝子を発現していない細胞の割合として評価した。細胞を染色し、Alexa Fluor 488標識抗体を使用してCD4発現を正規化し、APC標識一次抗体を使用して各ターゲットCD28、CD3E、およびCXCR3と比較した。
デザイン済み化学合成sgRNAを使用したCD4 + T細胞のタンパク質ノックアウトのフローサイトメトリー分析
初代ヒトCD4 + T細胞は、Lonza 96-well Shuttleシステムを介して、遺伝子ターゲットごとに個別のデザイン済み化学合成sgRNAまたは非ターゲティングコントロール（NTC）を使用して、Cas9 RNPで核内に導入された。72時間後、CD28、CD3E、およびCXCR3の機能的ノックアウトを、FACS分析によりターゲット遺伝子を発現していない細胞の割合として評価した。細胞を染色し、Alexa Fluor 488標識抗体を使用してCD4発現を正規化し、APC標識一次抗体を使用して各ターゲットCD28、CD3E、およびCXCR3と比較した。
プール化化学合成sgRNAによるFUS遺伝子の機能的ノックアウト
FUSの機能的ノックアウトは、CAGプロモーター下でCas9を恒常的に発現するU2OS細胞で評価した。0.04 µL DharmaFECT 4を用いて、FUSをターゲットとする3つの異なるEdit-Rデザイン済みsgRNAを含む25 nM sgRNAプールで細胞に導入した。トランスフェクションの72時間後に細胞を分割し、トランスフェクションの96時間後に細胞を固定し、FUSを標的とする一次抗体およびAlexa Fluor 488標識蛍光二次抗体で染色した。Hoechst染色は、核を識別するために使用した。
化学合成sgRNAはあらゆるタイプのCas9ヌクレアーゼと互換性があります。表に適切なトランスフェクション条件を示します。
| Cas9ヌクレアーゼ発現 | 推奨トランスフェクション試薬 |
|---|---|
| 安定して発現したCas9ヌクレアーゼ | 化学合成ガイドRNAのトランスフェクション用のDharmaFECT 1、2、3、または4 |
| Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミド | プラスミドおよび化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
| Cas9 mRNAまたはタンパク質NLS | mRNAまたはタンパク質と化学合成ガイドRNAの同時トランスフェクション用のDharmaFECT Duo |
仕様
| 出荷条件 | 室温 |
| 保管条件 | -20 C |
| 有効保存期間 | 12 ヶ月 |
| 推奨保管条件での安定性 | 少なくとも 12 か月 |
| 危険有害性 | 無し |
各種資料 / 情報
プロトコール
- Cas9ヌクレアーゼmRNA & 化学合成ガイドRNAの導入-エレクトロポレーション
- Cas9ヌクレアーゼタンパク質 & 化学合成ガイドRNAの導入-エレクトロポレーション
- Edit-R Cas9 nuclease protein and synthetic guide RNA transfection – Quick Protocol
テクニカルマニュアル