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Cas9ヌクレアーゼ発現試薬

プロモーターおよび濃縮方法を選択できる非レンチウイルスCas9発現プラスミド

Edit-R 化学合成ガイドRNAと直接共トランスフェクションするための、エンドトキシンフリーの精製済みDNAです。Cas9発現細胞の濃縮を簡便にする3つのオプションをご用意しています。

特長

CRISPR-Cas9システムにおけるCas9ヌクレアーゼ

CRISPR関連酵素Cas9は、ゲノムDNAの標的認識とDNA二重鎖切断(DSB)のためにガイドRNAを必要とするRNA-guidedエンドヌクレアーゼです。

Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドは、RNA pol IIプロモーターの制御下にあるS. pyogenes Cas9遺伝子のヒトコドン最適化バージョンをコードします。Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドは、Edit-R 化学合成ガイドRNAと直接共トランスフェクションするためのエンドトキシンフリーの精製済みDNAとして提供される非レンチウイルスベクターです。

Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドのハイライト

  • 使用する濃縮方法と細胞タイプに基づいて、3つのプラスミドオプションから選択できます。
    • mKate2蛍光レポーター
    • ピューロマイシン耐性マーカー
    • hCMVプロモーターおよびブラストサイジン耐性マーカー
  • 6つのSMARTchoiceプロモーターオプションから選択できます。

 

すべてのRNA pol IIプロモーターは異なる細胞環境で同等にアクティブではない

Cas9ヌクレアーゼの転写を制御する任意のプロモーターの活性は、生物学的状況によって大きく異なる可能性があり、Cas9の発現レベルが変化し、ひいてはDNA切断のレベルが変化します。したがって、細胞株または細胞タイプに最適なプロモーターを選択することは、実験におけるゲノム編集の程度に影響します。Cas9ヌクレアーゼ発現プラスミドには、6つの異なるよく特徴付けられた細胞プロモーターが用意されており、その中から選択できます。実験に最適なプロモーターの決定については、SMARTchoice promoter selection plateを参照してください。

Cas9ヌクレアーゼを発現するための6つのSMARTchoiceプロモーターオプション

Promoter Description
hCMV human cytomegalovirus immediate early promoter
mCMV mouse cytomegalovirus immediate early promoter
hEF1α human elongation factor 1 alpha promoter
mEF1α mouse elongation factor 1 alpha promoter
PGK mouse phosphoglycerate kinase promoter
CAG chicken beta actin hybrid promoter

製品情報

製品 製品タイプ プロモーター Size

Cas9 Expression Plasmid

mKate2 蛍光マーカー搭載タイプ

hCMV, mCMV,

hEF1α, mEF1α, PGK, CAG

120 µg
Puromycin 耐性遺伝子搭載タイプ 120 µg

CRISPR-Cas9 Nuclease Expression Plasmid

Blasticidin 耐性遺伝子搭載タイプ hCMV 120 µg
Cas9-mKate2発現プラスミドのベクターエレメントとプロモーターオプション

Cas9-mKate2 プラスミドは、単量体赤色蛍光タンパク質mKate2、および6種類のRNA pol II プロモーターのいずれかによって駆動されるS. pyogenes由来のヒトコドン最適化Cas9ヌクレアーゼを発現します。自己切断ペプチドT2Aを使用してmKate2の発現をCas9ヌクレアーゼにリンクすることにより、FACSによるmKate2陽性細胞のソーティングによりCas9発現細胞が濃縮され、ゲノム編集イベントを受けた細胞のパーセンテージが増加します。

Cas9-PuroR発現プラスミドのベクターエレメントとプロモーターオプション

Cas9-PuroRプラスミドは、ピューロマイシン耐性選択マーカー、および6種類のRNA pol II プロモーターのいずれかによって駆動されるS. pyogenes由来のヒトコドン最適化Cas9ヌクレアーゼを発現します。自己切断ペプチドT2Aを使用してピューロマイシン耐性マーカーの発現をCas9ヌクレアーゼにリンクすることにより、ピューロマイシンで処理して細胞を選択すると、Cas9発現細胞が濃縮され、ゲノム編集イベントを受けた細胞のパーセンテージが増加します。

ワークフロー

サポートデータ

SMARTCas9-mKate2発現プラスミドを使用したCas9発現U2OS細胞のFACSによる濃縮は、標的ゲノム編集の増加をもたらす

FACSによるSMARTCas9-mKate2発現プラスミドを使用したCas9発現U2OS細胞の濃縮により、ヒトPPIBの編集%が増加します。U2OS細胞に、SMARTCas9-mKate2(ヒトCMVプロモーターを含む)発現プラスミド、およびヒトPPIB遺伝子を標的とするtracrRNA:crRNAをトランスフェクトしました。72時間後にMoFlo XDP 100機器でmKate2蛍光のnegative、low、high対応する細胞をソーティングし、3つのチューブに分けました。SURVEYOR™ DNAミスマッチアッセイは、選別されたU2OS細胞で実行し、%ゲノム編集が、US(= unsorted)および対照であるUT(= untransfected)と比較しました。編集のレベルは、デンシトメトリー(%編集)を使用して計算しました。ソーティング細胞では、mKate2発現の増加と相関して、%ゲノム編集の増加が観察されます。

各種資料 / 情報

プロトコール
テクニカルマニュアル

関連リンク

【本社サイト】Cas9 nuclease expression reagents