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Dharmacon™ Edit-R™ CRISPR-Cas9ゲノム編集試薬
CRISPRコントロール

CRISPR-Cas9システムを用いたゲノム編集実験においてはコントロールの使用が重要です。

CRISPR-Cas9システムでは、効果的な遺伝子ノックアウトのために、ガイドRNAとCas9ヌクレアーゼの両方を細胞に導入する必要があります。どちらかの成分の量が少なすぎると、ゲノム編集が不十分になります。

生物種特異的ポジティブコントロールとDNAミスマッチ検出アッセイ用PCRプライマーを用いることにより、CRISPR-Cas9システムを用いたゲノム編集の実験条件が適切であるかを確認することができ、進行中の実験における優れたトランスフェクションの指標となります。

複数のNon-targetingコントロールの使用により、潜在的な非特異的影響を評価することができます。また、使用する細胞株やアッセイに最適なネガティブコントロールを選択できます。

HorizonのDetection Primerを用いたDNAミスマッチ検出アッセイ(SURVEYOR®またはT7EI)は、クローンまたは混合細胞集団におけるゲノム編集による変異導入の結果を評価するための比較的高速でハイスループットな方法です。それらは塩基の挿入および欠失の相対的な割合(機能的タンパク質ノックアウトではない)を評価することしかできませんが、以下の目的には常に有用です。

  • crRNA:tracrRNAトランスフェクション条件の最適化
  • Cas9ヌクレアーゼ発現を駆動するための最適プロモーターの決定

特長

実験に合わせたコントロールを選択可能

  • ヒト・マウス・ラット遺伝子についてご用意しています。
  • Edit-R CRISPR(knockout)crRNA用コントロールでは、2種類の包装単位でご提供しています。
  • Edit-R CRISPR(knockout)Lentiviral sgRNA用コントロールでは、レンチウイルス粒子あるいは大腸菌グリセロールストックをご用意しています。
  • DNAミスマッチ検出アッセイにおける検証済み検出プライマーとのキット化コントロール製品もご用意しています。

製品情報

Edit-R CRISPR (knockout) crRNA用コントロール

ポジティブコントロール

よく特徴付けられた遺伝子(Cyclophilin BおよびDNA (cytosine-5)-methyltransferase 3B)を標的とする種特異的な(ヒト・マウス・ラット)化学合成crRNA(ノックアウト用)です。DNAミスマッチ検出アッセイにおける検証済みPCRプライマーをセットとした製品もあります。

Edit-R Lethal crRNA コントロールは、一度にゲノム内の何千もの箇所を標的とすることによって細胞を死滅させるように設計されており、Cas9およびガイドRNA依存性であるため、これらのcrRNAコントロールを用いてCas9の機能性とcrRNA導入効率の両方をモニターすることができます。Edit-R Lethal crRNA #1は非常に強力な細胞死を誘導し、#2は中程度の細胞死を誘導します。これらの2つのコントロールは幅広いダイナミックレンジに対応しており、様々なヒト・マウス細胞においてcrRNA導入条件の至適化を可能にします。

ネガティブコントロール

non-targetingコントロール化学合成crRNAであり、ターゲット遺伝子特異的なcrRNAの非存在下で、CRISPR-Cas9コンポーネントに対するベースラインの細胞の応答を確認します。

製品

製品タイプ

生物種

Size

ポジティブコントロールcrRNA

Edit-R PPIB Synthetic crRNA Positive Control

ポジティブコントロールcrRNAのみ

Human,

Mouse,

Rat

5, 20 nmol

Edit-R DNMT3B Synthetic crRNA Positive Control

Edit-R PPIB crRNA Positive Control Kit

ポジティブコントロールcrRNA、

およびPCRプライマー

Edit-R DNMT3B crRNA Positive Control Kit

Edit-R Lethal crRNA Control #1, #2

Cas9の機能性とcrRNA導入効率のモニター用

Human,

Mouse

5, 20, 50 nmol

ネガティブコントロールcrRNA

Edit-R crRNA Non-targeting Control #1~5

ネガティブコントロールcrRNAのみ

5, 20 nmol

 

Edit-R CRISPR (knockout) sgRNA用コントロール

ポジティブコントロール

よく特徴付けられた遺伝子(Cyclophilin BおよびDNA (cytosine-5)-methyltransferase 3B)を標的とする種特異的な(ヒト・マウス・ラット)sgRNA発現用レンチウイルスベクター(ノックアウト用)です。DNAミスマッチ検出アッセイにおける検証済みPCRプライマーをセットとした製品もあります。

ネガティブコントロール

non-targetingコントロールsgRNA発現用レンチウイルスベクターであり、ターゲット遺伝子特異的なsgRNAの非存在下で、CRISPR-Cas9コンポーネントに対するベースラインの細胞の応答を確認します。

製品

製品タイプ

生物種

Size

ポジティブコントロールsgRNA

Edit-R PPIB Lentiviral sgRNA Positive Control

ポジティブコントロールsgRNAのみ

Human,

Mouse,

Rat

2 x 25 µL, 10^8 TU/mL, 
glycerol stock

Edit-R DNMT3B Lentiviral sgRNA Positive Control

Edit-R PPIB Lentiviral sgRNA Positive Control Kit

ポジティブコントロールsgRNA、

およびPCRプライマー

Edit-R DNMT3B Lentiviral sgRNA Positive Control Kit

ネガティブコントロールsgRNA

Edit-R Lentiviral sgRNA Non-targeting Control #1~10

ネガティブコントロールcrRNAのみ

2 x 25 µL, 10^8 TU/mL,

glycerol stock

sgRNAを発現するレンチウイルスベクターを導入した大腸菌の培養液にグリセロールを加えたものです。レンチウイルスベクターのパッケージングにはTrans-Lentiviral Packaging Kitがおすすめです。

Edit-R All-in-one Lentiviral sgRNAコントロール

ポジティブコントロール

よく特徴付けられた遺伝子(Cyclophilin BおよびDNA (cytosine-5)-methyltransferase 3B)を標的とする種特異的な(ヒト・マウス・ラット)sgRNA・Cas9発現用レンチウイルスベクターです。DNAミスマッチ検出アッセイにおける検証済みPCRプライマーをセットとした製品もあります。

ネガティブコントロール

non-targetingコントロールsgRNA・Cas9発現用レンチウイルスベクターであり、ターゲット遺伝子特異的なsgRNAの非存在下で、CRISPR-Cas9コンポーネントに対する細胞の応答を確認します。

製品

製品タイプ

生物種

プロモーター

Size

ポジティブコントロールsgRNA

Edit-R All-in-one PPIB Lentiviral sgRNA Positive Control

ポジティブコントロールsgRNAのみ

Human,

Mouse,

Rat

mCMV,

hEF1a

50 µL, 10^7 TU/mL, 
glycerol stock

Edit-R All-in-one DNMT3B Lentiviral sgRNA Positive Control

Edit-R All-in-one PPIB Lentiviral sgRNA Positive Control Kit

ポジティブコントロールsgRNA、およびPCRプライマー

Edit-R All-in-one DNMT3B Lentiviral sgRNA Positive Control Kit

ネガティブコントロールsgRNA

Edit-R All-in-one Lentiviral sgRNA Non-targeting Control #1~5

ネガティブコントロールcrRNAのみ

mCMV,

hEF1a

50 µL, 10^7 TU/mL, 
glycerol stock

sgRNAを発現するレンチウイルスベクターを導入した大腸菌の培養液にグリセロールを加えたものです。レンチウイルスベクターのパッケージングにはTrans-Lentiviral Packaging Kitがおすすめです。

関連リンク

【Dharmacon専用サイト】CRISPRコントロール

遺伝子ノックアウト用ガイドRNA

Cas9ヌクレアーゼ

Trans-Lentiviral Packaging Kit

バッファー・水・培地