MENU
Horizon本社サイトへ
お問い合わせ
ホーム製品 / サービス情報CRISPR ModulationCRISPRi 遺伝子転写抑制CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 レンチウイルス粒子

CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 レンチウイルス粒子

安定したdCas9-SALL1-SDS3発現細胞集団を作製するための精製レンチウイルス粒子

 

特長

CRISPRiによる効率的な内在性遺伝子転写抑制

CRISPR interference(CRISPRi)は、CRISPR-Cas9遺伝子編集システムを改変したものです。HorizonのCRISPRiシステムは、独自の転写リプレッサー(SALL1およびSDS3)に融合された触媒活性が不活性化されたCas9(dCas9)を利用します。転写開始部位(TSS)のすぐ下流の遺伝子を標的とするアルゴリズム設計のガイドRNAと組み合わせると、転写抑制が促進されます。

Diagram of CRISPRi-based transcriptional repression

dCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子の使用のハイライト
  • 使用細胞における最適な発現のために、3つの異なるプロモーターから選択できます(以下のオプションを参照)。
  • qPCR力価測定により、1×10^7 TU/mL以上の機能力価で、即時形質導入用の濃縮精製レンチウイルス粒子として提供されます。
  • ブラストサイジン耐性マーカーにより、dCas9-SALL1-SDS3導入細胞の選択が可能です。
すべてのRNA pol IIプロモーターが異なる細胞環境で等しく活性であるわけではありません

dCas9-SALL1-SDS3の転写を制御するプロモーターの活性は、生物学的状況によって大きく異なる可能性があり、その結果、dCas9-SALL1-SDS3の発現レベルが変動し、遺伝子転写抑制のレベルが変動します。使用する細胞株に最適なプロモーターを選択することは、十分な遺伝子発現にとって重要です。

 

CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 lentiviral vectors

dCas9-SALL1-SDS3を発現させるためのSMARTchoiceプロモーターオプション

Promoter Description
hCMV human cytomegalovirus immediate early promoter
mCMV mouse cytomegalovirus immediate early promoter
hEF1α human elongation factor 1 alpha promoter
dCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子を使用したCRISPRi実験に必要な試薬
  • CRISPRidCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子
  • ターゲット遺伝子のCRISPRiレンチウイルスsgRNA(ワークフロー参照)

製品情報

    製品 プロモーター Size
    CRISPRmod CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 lentiviral particles

    hCMV, mCMV, hEF1α

    50 µL, 10^7 TU/mL

    ワークフロー

    化学合成sgRNAdCas9-SALL1-SDS3レンチウイル粒子を使用したCRISPRiワークフロー

    CRISPR interference workflow with lentiviral dCas9-SALL1-SDS3 and synthetic sgRNA

    dCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子で細胞を形質導入して、CRISPRi実験向けの安定したdCas9-SALL1-SDS3発現細胞を作製します。次に、ターゲット遺伝子に特異的なCRISPRi化学合成sgRNAを導入します。このシステムは、トランスフェクション可能な細胞モデルでのアレイ化スクリーニングに最適です。

     


    レンチウイルスsgRNAdCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子を使用したCRISPRiワークフロー
    CRISPRi workflow using lentiviral dCas9-SALL1-SDS3 and expressed sgRNA

    CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3レンチウイルス粒子を使用して安定したdCas9-SALL1-SDS3発現細胞株を確立し、CRISPRiレンチウイルスsgRNA粒子(左)またはプラスミドsgRNA(右)を導入するワークフローです。このシステムは、トランスフェクションが難しいタイプの細胞を扱う場合に理想的です。

    サポートデータ

    dCas9-SALL1-SDS3を使用したCRISPRiは、dCas9-KRABを使用したCRISPRiよりも強力なタンパク質レベルの抑制をもたらす

    CRISPRi with dCas9-SALL1-SDS3 results in more robust protein level repression than CRISPRi with dCas9-KRAB

    FUSの機能的ノックダウンは、hEF1αプロモーター下でdCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3のいずれかを構成的に発現するU2OS細胞で評価されました。 FUSを標的とする3つのCRISPRmod CRISPRiデザイン済みsgRNAのプールフォーマット25nM sgRNAを、DharmaFECT 4トランスフェクション試薬を使用して、細胞にトランスフェクトしました。72時間後に細胞を分割し、96時間後に細胞を固定し、FUSを標的とする一次抗体とAlexa Fluor488標識蛍光二次抗体で染色しました。核の同定にはヘキスト染色を使用しました。


     

    dCas9-SALL1-SDS3発現細胞は、dCas9-KRABと比較して、より大きく、より一貫性のあるCRISPRi遺伝子転写抑制を示す

    CRISPRi gene repression is observed 24 hours post-transfection and is maximal 48-72 hours post transfection

    CRISPRi化学合成sgRNAは、dCas9-KRABおよびdCas9-SALL1-SDS3発現細胞の両方で、トランスフェクション後48〜72時間で最大の転写抑制を達成します。dCas9-KRABまたはdCas9-SALL1-SDS3を安定して発現するU2OS細胞を、10,000細胞/ウェルでプレーティングし、DharmaFECT 4トランスフェクション試薬を使用して、CBX1、HBP1、またはSEL1Lをターゲットとするデザイン済みsgRNAのプールフォーマット25nM sgRNAでトランスフェクトしました。24、48、72、96、120、および144時間後に細胞を回収し、全RNAを単離し、RT-qPCRを使用して相対的な遺伝子発現を測定しました。各標的遺伝子の相対的発現は、ハウスキーピング遺伝子としてGAPDHを用いたΔΔCq法で計算され、non-targetingコントロール(NTC)に対して正規化しました。

    各種資料 / 情報

    CRISPRidCas9-SALL1-SDS3レンチウイルスベクター仕
    出荷条件 ドライアイス
    保管条件 -80 C
    推奨保管条件での安定性 少なくとも 12 か月
    危険有害性 無し
    技術資料

    関連リンク

    【本社サイト】CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 lentiviral particles