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CRISPR Modulation

改変CRISPR-Cas9システムを用いて内在性遺伝子の転写活性化 / 抑制を可能に

遺伝子切断を伴わないCRISPR

Horizonの新しい遺伝子発現調節ツールであるCRISPR modulationは、DNAを切断することなく、標的遺伝子の転写を活性化(CRISPRa)または抑制(CRISPRi)します。

利点およびアプリケーション
  • 内在性調節:遺伝子のネイティブコンテキスト内での発現の制御
  • CRISPRレベルの特異性:PAMアンカー型ターゲティングを活用
  • マルチプレックス:複数の遺伝子を同時に活性化または抑制可能
  • 直交検証:CRISPRノックアウトまたはRNAiと並行して使用し、データセットを堅牢に
CRISPRi(CRISPR interference)遺伝子転写抑制

標的とする内在性遺伝子の発現を抑制します。

CRISPRa(CRISPR activation)遺伝子転写活性化

標的とする内在性遺伝子の発現を活性化します。

CRISPRmodとは?

CRISPRmod(CRISPR modulation)は、標的とする内在性遺伝子の発現調節に使用される、CRISPR activationおよびCRISPR interference試薬からなるHorizo​​nの試薬群です。

分子生物学のセントラルドグマでは、DNAはRNAに転写され、次にタンパク質に翻訳されます(下図)。研究者は、遺伝子の機能をよりよく理解するために、機能喪失または機能獲得実験を通じて、この経路を複数のポイントで調節することができます。

既存のCRISPRノックアウトおよびHDRノックイン技術は、研究者に細胞内のDNAを編集(継承可能な変更)することを可能にしました。一方、従来のRNAi技術ではmRNAが分解され、翻訳が妨げられます。

CRISPRmodは、転写レベルで遺伝子発現を調節する新しい方法を提供します。Horizo​​n CRISPRmodポートフォリオには、ターゲット遺伝子発現をそれぞれアップレギュレートまたはダウンレギュレートするために、CRISPRaシステムとCRISPRiシステムの両方があります。

CRISPRmodを使用する理由は?

CRISPRmodは、内在性遺伝子調節のために、新世代のCRISPRベースの実験を可能にします。CRISPRmodは、他の遺伝子調節法から観察された表現型を確認するための直交検証としても使用できます。

  • より生物学的に関連性のあるモデルのために、ネイティブコンテキスト内で遺伝子を活性化または抑制します。
  • 複数の遺伝子を同時に調節して、パスウェイまたはネットワークをよりよく理解できます。
  • より堅牢なデータセットのために、CRISPRノックアウトまたはsiRNAの結果を直交的に検証できます。

CRISPRmodはどのように機能しますか?

2つのCRISPRmodシステム(CRISPRaおよびCRISPRi)は、活性化因子または抑制因子のいずれかに融合した非活性化Cas9コンストラクトを使用して、転写調節のためのPAMアンカー型ターゲティングの力を活用します。CRISPRmodは、遺伝子発現調節にCRISPRの精度をもたらします。

ネイティブのCas9 DNA切断機能は、RuvCIおよびHNHヌクレアーゼドメインの点突然変異(W. Cheng et al.)によって消滅し、dCas9deactivated Cas9または dead Cas9)に変化しました。このdCas9タンパク質の C末端に、アクチベーターまたはリプレッサードメインを融合させることにより、標的遺伝子の転写調節を行うように設計されています。

転写を活性化するためにTSSの上流に結合するCRISPRa機構(左)、および転写をブロックするために標的遺伝子TSSの下流に結合するCRISPRi機構(右)を示す概略図

関連リンク

【本社サイト】CRISPR Modulation